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    普諾賽4月直播答疑:常見細胞污染類型及解決方法

    發表時間:2022-05-07  |  點擊率:150

    在4月28日開播的“常見細胞污染類型及解決方法"課程中,有很多老師就細胞污染提出了疑問。我們篩選出部分代表性問題,并作了詳細解答。

     

    01

    Q:在細胞培養液中,有種可以游動的蟲子是什么污染?

    A:是細菌污染。帶鞭毛的細菌就是會游動的。

     

    02

    Q:有很多黑點,在原位顫抖,沒那么明顯的定向運動,是什么污染?

    A:細胞碎片、血清沉淀和有些細菌污染,都會在原位顫抖。前者是原地做不規律的布朗運動,細菌是原地轉動,頻率會高很多。

     

    03

    Q:血清的絮狀物雜質屬于正?,F象嗎?

    A:血清里面有一些大分子蛋白和一些纖維析出,呈現絮狀,也有一些磷酸鈣析出呈現小黑點,這些都是很常見的。沉淀太多,可以離心去掉部分。血清沉淀的多少也跟血清的溶解方式有關,溶解過程中最好是4℃,期間不時搖晃進行溶解。根據普諾賽多年培養細胞經驗,血清的沉淀多與少并不決定血清質量。

     

    04

    Q:液體變微黃、渾濁怎么解決?

    A:這個是典型的細菌污染。如果細胞形態尚且完整,可以嘗試用10%的雙抗清洗去除,或者使用別的抗生素清除,如慶大霉素50U/mL、四環素10μg/mL等;如果細胞狀態已經很差,就沒有挽救的價值了。

     

    05

    Q:為什么有的培養基天天需要換液呢?

    A:正常情況下,是不需要每天換液的。培養基橘黃色是細胞比較喜歡的環境,正常是2~3天換一次比較好,換液多了細胞狀態反而容易受影響。如果是因為培養基異常消耗,才需要每天換液,那么我們要做的是找到異常消耗的原因,是細胞量過多,還是有其他細菌或者支原體污染。先找到原因才能不用每天換液。

     

    06

    Q:我凍存的細胞,每次復蘇養幾天就污染了,是什么原因呢?

    A:如果凍存前就帶進去了污染,那么同一批次的復蘇出來都會有污染。這種情況下,可以在復蘇當天給予抗生素清除(不能用雙抗),如慶大霉素50U/mL、四環素10μg/mL等;如果同一批有復蘇沒有污染的情況,要考慮復蘇過程,建議換一下水浴鍋的水和其他試劑耗材再復蘇。

     

    07

    Q:細胞培養不生長,傳代擴不起來,是不是就是支原體污染?

    A:支原體污染肉眼是很難區分的,支原體污染會導致細胞狀態變差,但是細胞狀態變差并不是都是支原體造成的,所以我們還是要用支原體檢測加以區分。

     

    08

    Q:培養基污染以后,可以過濾一下繼續使用嗎?

    A:不建議繼續使用。培養基里面可能會有殘留的細菌分泌物,比如內毒素等,可能會影響細胞生長。

     

    09

    Q:培養箱水盤用什么抑菌劑?

    A:傳統方法用硫酸銅,但是硫酸銅屬于重金屬,還是有一定的毒性的。建議使用水浴鍋安全衛士,安全無毒,可以持續一周無菌狀態。

     

    10

    Q:試劑已經全部換新的了,還是一直污染,是什么原因?

    A:如果試劑盒耗材全部更換了,還需要排除下凍存前是否有污染。再就是是否存在操作問題,可考慮換其他人養一下試試。

     

    11

    Q:懸浮細胞碎片形成的黃團怎么處理呢?

    A:懸浮細胞碎片形成的黃團可以通過低速離心去除,前提是細胞量一定要夠多,轉速一般可以降低到800rpm左右。離心完上清別急著丟,先看下細胞是否已經離心下來,也可以根據細胞大小調節離心轉速。

     

    12

    Q:細胞里面有一些小方塊一樣的東西,是什么原因?

    A:小方塊一般是結晶類的??梢韵扔门囵B基或者PBS稀釋溶解后換液,看有沒有改善。

     

    13

    Q:放了五個月的完全培養基,出現絮狀懸浮物,但是觀察不是細菌,可以過濾后加點血清繼續使用嗎?

    A:不建議繼續使用。絮狀物首先要排除霉菌類的污染;即使排除了霉菌,完培產生絮狀物析出了,也會對成分有一定的影響,影響后期培養細胞。

     

    14

    Q:飼養雜交瘤細胞,如果觀察有沒有污染,大概要在多大倍鏡下觀看?

    A:觀察污染的話400倍鏡就夠了,10X目鏡加40X物鏡。

     

    15

    Q:請問貼壁細胞表面有白膜,培養液惡臭,是什么原因導致的污染?

    A:有白膜和惡臭應該是有污染無疑了,還很嚴重,具體是細菌還是真菌,要結合顯微鏡下的菌體形態來進一步區分。

     

    16

    Q:細胞污染后,用10倍雙抗處理后,沒有再長,這時細胞可以凍存嗎?

    A:細菌不再生長,恢復正常1%抗生素后一周內沒有再長起來,就是清除干凈了,可以凍存。

     

    17

    Q:孵箱中一瓶細胞有黑膠蟲污染,慢慢地整個孵箱都有污染了,那孵箱怎么打掃?

    A:把細胞全部轉移走,再用消毒液把培養箱全部擦拭一遍;培養箱水一定要清理干凈;培養箱角落和表面都噴上細胞房衛士,關閉培養箱保持30分鐘,再打開散氣30分鐘,換上干凈的無菌水就行了。

     

    18

    Q:請問培養箱滅菌水多久換一次呢?換的時候每次都要90℃滅菌么?

    A:水浴鍋的滅菌水不加抑菌劑的話,建議是每次復蘇前都更換新的;加了水浴鍋安全衛士,可以一周換一次,水是121℃滅菌20分鐘。

     

    19

    Q:液氮有沒有可能污染?

    A:理論上液氮這種極-端的環境里,是不會有生物存活的,細菌凍存也是需要保護劑的。

     

    20

    Q:新復蘇的細胞,一天后正常貼壁,但是培養液里懸浮大量的黑色團塊,是什么原因呢?

    A:可能是有細菌污染了,還是要結合顯微鏡下的黑團形態來進一步確診。

     

    5月直播課“細胞傳代增殖問題",將于5月26日開播,大家記得關注哦~


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