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    細胞學堂 | H22(小鼠肝癌細胞)腹水傳代怎么做?掌握這些就夠了

    發表時間:2022-05-31  |  點擊率:54

    H22(小鼠肝癌細胞)分離自小鼠腹水,由大連醫科學院建立。在實驗研究中,常將H22細胞接種于小鼠皮下,建立異位移植模型,廣泛用于抗腫瘤藥物藥效學初步篩選。



    H22細胞基礎信息

    生長特性:

          懸浮細胞

    細胞形態:

          淋巴母細胞樣

    生長培養基:

          RPMI-164010% FBS1% P/S

    推薦傳代比例:

          3×10^5-5×10^5cells/mL

    推薦換液頻率:

          2~3次/周

    凍存液:

          55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO

    培養條件:

         氣相:空氣,95%;CO2,5%

         溫度:37℃



    腹水傳代培養

    了解完H22細胞的基礎信息,我們就可以著手準備細胞培養了。普諾賽已經為大家總結好了詳細的腹水傳代步驟,希望能對大家有所幫助!


    1


    H22體外培養至合適密度后,離心(1200r/min,3min)收集細胞,用PBS重懸備用;

    2

    取0.2mL培養好的細胞計數(細胞密度為1*10^7/mL)后,腹腔注射至小鼠腹腔;

    3

    飼養5-6天,小鼠腹水可收集(4-8mL);

    4

    采用無菌抽取或解剖收集腹水后,用PBS稀釋2倍后離心(1200r/min,3min),去上清,重復洗滌過程1-2次,加入10mLPBS重懸制備成細胞懸液備用;

    5

    取50mL離心管加入10mL小鼠外周血淋巴細胞分離液,上層加入10mL細胞懸液,離心收集沉淀(2000r/min,10min),重復2-3次;

    6

    將收集的沉淀用1640培養基重懸,接種于T175培養瓶中,接種密度為4*10^5 /mL,放置培養箱培養8-12h;

    7

    收集細胞懸液離心(1200r/min,3min),用程序凍存液將細胞凍存,凍存密度為10^7/mL。




    注意事項

    掌握以上培養步驟就一定可以培養好細胞嗎?你還需要掌握以下這些注意事項 :

    1

    新手可以選擇處死小鼠,然后先用注射器吸出一些細胞,再剪開腹腔,用槍吸出剩下的;熟練了可以不處死小鼠,直接注射器插進去吸,小鼠還能重復接種;

    2

    注意不要戳破內臟,否則容易造成細胞交叉污染;

    3

    小鼠飼養時間控制在5天為佳。時間過長,小鼠會死亡或收集的腹水中紅細胞含量過高;

    4

    復蘇之后會有死細胞,但不影響正常腹水的產生;

    5

    H22細胞體外培養增殖幾代就需要腹水培養一次,否則細胞狀態會急速變差,碎片增多。做實驗需提前擴增至所需的細胞量然后凍存起來,長期培養需5代內腹水培養一次;

    6

    中間每一次傳代可以先離心,PBS或生理鹽水重懸后打給下一只;

    7

    收集腹水紅細胞過多時,可以用紅細胞裂解液去除;

    8

    用分離液分離細胞時,可多次分離篩選,保證細胞的純度;

    9

    凍存細胞最好分離出來后培養8個小時左右再凍存,可以有效去除可能沒有篩出去的血紅細胞,還可以讓細胞的狀態調整至最佳;

    10

    細胞活力不一樣、接種細胞量不一樣,腹水長出的時間就不一樣。接種是否成功可以通過觀察老鼠的狀態來確定,接了腹水的老鼠活動力會變弱。



    常見問題及解答


    關于H22細胞腹水傳代,普諾賽將大家疑問較多的問題,總結如下。

    01

     H22腹水傳代可以用哪些小鼠?

    可以用balb/c小鼠、Km小鼠等,體重在20g左右。

    02

    H22細胞收貨有哪些注意事項?

    到貨后,請將細胞瓶豎立著靜置2~4h,然后把瓶中培養基上面部分培養基小心吸出,留底部細胞和3mL左右培養基在原瓶。吸出的細胞離心收集細胞沉淀,離心轉速1200轉3分鐘。

    03

    為什么剛到貨的H22細胞會出現細胞聚團?

    懸浮細胞發貨時密度不能太低,因路上運輸,狀態不穩定,剛到貨時可能會出現聚團的情況。待穩定培養幾天,聚團會消失,需要注意培養時少動細胞,以免損傷細胞。


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